Caractérisation structurale de kinases humaines à partir d'un crible de banques de polypeptides

TL;DRAbstract

Obtenir des quantités suffisantes de protéines solubles est souvent un obstacle à la caractérisation structurale des protéines. Une approche pour surmonter cela est d'isoler des domaines protéiques en utilisant des méthodes itératives de création et d'analyse de constructions. Un moyen d'y parvenir consiste à créer, par troncation enzymatique, des banques d'ADN, contenant toutes les constructions possibles d'une même protéine, et à tester à la fois l'expression et la solubilité de celles-ci. Durant la réalisation de cette thèse, une nouvelle méthode, appellée ESPRIT pour Expression of Soluble Proteins by Random Incremental Truncation, a été utilisée pour définir des domaines protéiques. Plusieurs protéines kinases avec des domaines multiples, essentiels aux fonctions cellulaires et dont la production sous une forme soluble avait échoué auparavant, ont été analysées par cette nouvelle technologie. Cette méthode a d'abord été optimisée pour améliorer la qualité et l'efficacité des banque

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