Autodisplay humaner Hyaluronidasen und Entwicklung von Verfahren zur Testung von Inhibitoren

TL;DRAbstract

Eine ubermasige Expression der humanen Hyaluronidasen hHyal-1, hHyal-2 und hPH-20 steht in Zusammenhang mit Erkrankungen wie Arthrose, Blasen-, Brust- und Prostatakrebs. Fur die Suche nach Inhibitoren werden grosere Mengen an humanen Hyaluronidasen benotigt, die bisher jedoch in Escherichia coli nur nach Aufreinigung aus „inclusion bodies“ und in geringem Umfang gewonnen werden konnen. Um diesen Mangel zu beseitigen, wurden in der vorliegenden Arbeit erstmals humane Hyaluronidasen mittels Autodisplay in katalytisch aktiver Form auf der Oberflache von E. coli F470 exprimiert. Es wurden zudem ein „stains-all“ Testverfahren sowie ein Morgan-Elson Testverfahren mit Rinderhyaluronidase (BTH) auf ihre Verwendbarkeit zur Messung von Hyaluronidase-Aktivitat bei pH 3,5 und pH 7 untersucht und fur die Verwendung in Mikrotiterplatten optimiert. Durch Erhohung der Sensitivitat konnte zum ersten Mal ein „stains-all“ Testverfahren zur Bestimmung von HA bei pH 3,5 sowie in Anwesenheit von Zellen dur

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